及时荧光定量（RT-qPCR）思必群多都不生疏，依据原来习设施的差异，能够分为“一步法”与“两步法”。目前来说，两步法咨议者用的比力多，即是将反转录和PCR扩增分两步实行，最初从RNA模板反转录获得cDNA，获得的cDNA再实行一次或多次差异的PCR反响。这种本事的最大益处是能够存在反转录后的cDNA产品，但对待须要对洪量样品实行认识或定量PCR，又或是对防污染请求比力高的咨议者来说是不实用的，而一步法RT-qPCR就很好的管理了这类实习困难。

　　简略来说，一步法荧光定量即是逆转录和定量PCR正在一个反响管内一步完工，使逆转录酶与DNA聚会酶正在统一管内同样缓冲液要求下完工反响，团体实习操作方便，极端适合于咨议生操纵。目前，除了像Thermo Fisher此类国际生物试剂品牌，国内的像BIOG也有效下来不错的一步法荧光定量试剂盒，这些试剂普通拥有以下几个特色:

　　加样闭节少，两步反响都正在一个管中完工，这种本事能克隆微量 mRNA 而不需构修 cDNA 文库，省略了cDNA与qPCR反响之间系统转换的进程，操作便当速速，也大大普及了实习的成果，极端实用于高通量扩增/筛选；

　　cDNA合成和扩增之间不须要翻开反响管盖，更少的移液设施可能删除污染的危险，同时拥有更少的实习偏差；

　　一步法反转录获得的一切cDNA都用来扩增，于是比拟于两步法来说矫捷度更高，可越过10倍，且最低可检测到1 pg总RNA中的标的片断，有些两步法无法检测到的数据，用一步法能够检出。

　　其余，咱们还采办了一款国产物牌的一步法RT-qPCR试剂盒与BIOG的实行了比力，结果如下图所示，从扩增弧线结果来看，BIOG一步染料法荧光定量PCR试剂盒反响更为矫捷，线性畛域宽，不变性好。